PALCAM AGAR BASE

Code: CM0877

Môi trường chẩn đoán chọn lọc và phân biệt để phát hiện monocytogenes.

PALCAM SELECTIVE SUPPLEMENT

Code: SR0150

* Điều chỉnh theo yêu cầu để đáp ứng tiêu chuẩn

Hướng dẫn sử dụng

Hòa tan 34.5g trong 500ml nước cất. Đun cho đến khi tan hoàn toàn, khử trùng ở 121°C trong 15 phút. Làm mát đến 50°C, thêm một ống PALCAM Selective Supplement (SR0150) vô trùng. Trộn đều và đổ vào đĩa petri.

Thêm 2.5% (v/v) Egg Yolk Emulsion (SR0047) vào môi trường có thể giúp phục hồi Listeria.

Mô tả sản phẩm

Môi trường PALCAM dựa trên công thức mô tả bởi Văn Netten et al.¹ và được khuyên dùng cho phân lập Listeria monocytogenes từ thực phẩm.

Nhận thức và lo ngại xung quanh sự hiện diện cao của Listeria monocytogenes trong thực phẩm đã dẫn đến sự phát triển của nhiều môi trường để phân lập nó. Tuy nhiên, Cassiday và Brackett kết luận rằng không có phương pháp duy nhất tại thời điểm đó là phù hợp để sử dụng với tất cả các loại thực phẩm.

PALCAM có tính chọn lọc cao do sự hiện diện của lithium chloride, ceftazidime, polymyxin B và acriflavine hydrochloride. Nó cho phép chẩn đoán phân biệt dễ dàng của Listeria monocytogenes bằng cách sử dụng hệ thống chỉ thị nhân đôi.

1. aesculin và sắt II

2. mannitol và phenol đỏ

 Listeria monocytogenes thủy phân aesculin dẫn đến sự hình thành của một quầng đen xung quanh khuẩn lạc. Listeria monocytogenes không lên men mannitol dễ dàng phân biệt với chất gây ô nhiễm, chẳng hạn như vi khuẩn ruột và khuẩn tụ cầu, có thể được thực hiện như này sẽ lên men mannitol. Công thức này tạo ra một sự thay đổi pH từ đỏ sang vàng dùng chỉ thị phenol đỏ. Việc bổ sung các lòng đỏ trứng vào môi trường PALCAM đã chỉ ra để hỗ trợ sửa chữa các tế bào bị hư hỏng.

Yêu cầu kỹ thuật

Kỹ thuật phân lập vi khuẩn Listeria monocytogenes sẽ phụ thuộc vào nguyên liệu thử nghiệm. Bình thường đối với mẫu thử nghiệm đầu tiên được cấy vào một canh thang tăng sinh để cho phép tăng sinh trước khi phân lập và định danh. Tùy thuộc vào loại mẫu được sử dụng, phương pháp thích hợp và canh thanh làm giàu chọn lọc nên được sử dụng trước khi cấy vào đĩa môi trường PALCAM. Theo nguyên tắc chung, sử dụng Listeria Selective Enrichment Medium (CM0862 và SR0149) cho các sản phẩm sữa, và Listeria Selective Enrichment Media UVM (CM0863, SR0142 và SR0143) và Fraser Broth (CM0895 và SR0156) cho các loại thịt và gia cầm.

1. Cấy một vòng que cấy từ môi trường tăng sinh chọn lọc lên đĩa môi trường PALCAM
2. Ủ ở 37°C trong 48h trong điều kiện vi hiếu khí. Điều kiện vi hiểu khí có thể được tạo ra tốt nhất bằng cách sử dụng Oxoid Campylobacter Gas Generating Kit (BR0056) kết hợp với Bình ủ kị khí và chất xúc tác (BR0042). Cho bình có dung tích nhỏ hơn (2.5 litres) use the Oxoid Campylobacter Gas Generating Kit (BR0060). Thay thế thì sử dụng CampyGen (CN0025 hoặc CN0035). CampyGen không cần nước để kích hoạt
3. Kiểm tra khuẩn lạc đặc trưng của Listeria sau 48 giờ nuôi cấy
4. Khuẩn lạc được xác định là Listeria spp. giả định phải được xác nhận bằng các thử nghiệm huyết học và sinh hóa. 

Sau 48 giờ nuôi cấy, khuẩn lạc điển hình của Listeria spp. có đường kính xấp xỉ 2mm, có màu xanh xám với tâm màu đen và có quầng đen trên nền môi trường màu đỏ. Enterococci hoặc tụ cầu thường xuyên phát triển trên môi trường PALCAM hình thành khuẩn lạc màu xám với quầng màu xanh nâu hoặc khuẩn lạc màu vàng với quầng màu vàng.

Điều kiên bảo quản và hạn sử dụng

Bảo quản môi trường dạng bột ở 10-30°C và sử dụng đến ngày ghi trên nhãn.

Bảo quản thuốc thử bổ sung ở 2-8°C trong tối và sử dụng trước ngày ghi trên nhãn.

Bảo quản môi trường đổ sẵn ở ở 2-8°C trong tối lên tới 4 tuần.

Trạng thái

Môi trường dạng bột: dạng bột đồng nhất, màu vàng rơm.

Môi trường hoàn nguyên: Gel màu đỏ

Quản lý chất lượng

Khuyến cáo

Acriflavine hydrochloride được hoạt hóa bởi ánh sáng có thể ức chế sự phát triển vi khuẩn Listeria.

Tài liệu tham khảo

1. van Netten P. et al. (1989) Int. J. Food Microbiol. 8. (4) 299-316.
2. Farber J.M. and Peterkin P. (1991) Microbiol. Rev. 55. 476-511.
3. in’t Veld P.H. and de Boer E. (1991) Int. J. Food Microbiol. 13. 295-300.
4. Gunasinghe C.P.G.L. Henderson C and Rutter M.A. (1994) Lett. Appl. Microbiol. 18. 156-158.
5. Lund A.M., Zottola E.A. and Pusch D.J. (1991) J. Food Prot. 54. 602-606.
6. Cassiday P.K. and Brackett R.E. (1989) J. Food Prot. 52. 207-214.
7. van Netten P., van Gaal B. and Mossel D.A.A. (1991) Lett. Appl. Microbiol. 12. 20-22.
8. Bille J. and Doyle M.P. (1991) ``Listeria and Erysipelothrix’’ 287-295 in Balows A., Hausler W.J. Jnr., Herrman K.L. Isenberg H.D. and Shadomy H.J. (Eds) Manual of Clinical Microbiology, 5th Edition, American Society for Microbiology, Washington D.C.